对标 Mayo Clinic 发表于 JoVE 的核壳微胶囊制备工艺—— 三层高度差异化 SU-8 母模、PDMS 精密翻模、±2 μm 对准键合, 普通实验室即可复现发表级微流控芯片。
2021 年,Mayo Clinic 生理与生物医学工程系团队在 Journal of Visualized Experiments 发表论文(e62944),报道了一种利用同轴聚焦微流控芯片,将人多能干细胞(hPSC)单细胞悬液 封装进直径 400 μm 的核壳水凝胶微胶囊,48 小时内自组装为干细胞球。
这套工艺的核心难点不在生物实验本身,而在芯片加工——芯片需要三层不同高度的流道: 芯层 120 μm、壳层 200 μm、油相通道 300 μm,三层流道在同一个喷嘴处同轴汇聚, 最终通过两片 PDMS 对准键合形成三维结构。
文献原文:
Gwon K., Hong H.J., Gonzalez-Suarez A.M., et al. Microfluidic Fabrication of Core-Shell Microcapsules carrying Human Pluripotent Stem Cell Spheroids. J. Vis. Exp. 2021, 176, e62944. DOI: 10.3791/62944
芯片包含四个入口(core / shell / shielding oil / crosslinker oil),经过一段蛇形通道汇入收集管。 芯层、壳层、油相通道高度分别为 120 μm、200 μm、300 μm,在喷嘴处形成同心环形流路。 文献还配套设计了一片前置解离芯片(单层 SU-8,50 μm 高度), 用三角形柱阵列打散 hPSC 细胞团块,将胶囊细胞占有率从 57% 提升至 90% 以上。
| 层级 | 高度 | 功能 |
|---|---|---|
| Layer 1 · 芯层 | 120 μm | 输送 hPSC 单细胞悬液(水相核心) |
| Layer 2 · 壳层 | 200 μm | 输送 PEG-4-Mal 壳层溶液(水相外壳) |
| Layer 3 · 油相 | 300 μm | 矿物油 + 表面活性剂 + 交联剂 DTT |
| 解离芯片 | 50 μm | 三角形柱阵列打散细胞团块 |
三次旋涂(60 / 40 / 50 μm),分层对准曝光,一次性显影。160℃ 硬烘 + 氯三甲基硅烷脱模处理。
PDMS 基胶:固化剂 = 10:1 配比,真空脱泡后浇筑母模,80℃ 固化 60 min 以上,剥离、切割、打孔。
O₂ 等离子活化 2 min,显微镜下滴加微量蒸馏水辅助对位,80℃ 烘箱过夜完成不可逆键合。
顶旭 SU-8 模具加工平台集成桌面紫外光刻机、高精度匀胶机、数显热板、千分测厚规与三目检测显微镜。 相比传统洁净间光刻产线,整套设备占地面积小、环境要求低, 让研究人员在自己的实验室里完成 10–350 μm 厚度范围的 SU-8 母模制备。
PDMS 芯片加工平台覆盖电子秤、真空脱泡器、PDMS 浇筑器、恒温烘箱、台式打孔器、 PDMS 切割器、DZ-100 对准平台与氧等离子键合机, 完成从液态 PDMS 到多层不可逆键合芯片的全部工序。
三层高度差流道能否在喷嘴处精确同轴汇聚,取决于两片 PDMS 翻模后的对准精度。 DZ-100 对准平台融合 XYZ 三轴位移、旋转功能与 CCD 可视化成像, 在显微镜下完成 PDMS/PDMS、PDMS/玻璃、PDMS/硅的多层结构对位,对准精度可达 ±2 μm。
配合氧等离子键合机(20.0 MHz 射频,石英腔体,10–30 Pa 真空), PDMS 表面羟基化后与另一层 PDMS 形成不可逆共价键合, 80℃ 长时间烘烤后表面恢复疏水,适配水-油两相微胶囊生成实验。
封装后的 hPSC 在 48 小时内自组装为干细胞球,胶囊在搅拌生物反应器中可承受剪切力保护细胞; 水凝胶壳层可负载生长因子,实现诱导分化信号的局部持续释放。
| 能力维度 | 指标 | 说明 |
|---|---|---|
| SU-8 母模层数 | 最多 4 层(本案例 3 层) | 分步旋涂—对准曝光—一次显影 |
| 单流道高度范围 | 10 – 350 μm | SU-8 2000 系列胶厚曲线覆盖 |
| 曝光 / 套刻分辨率 | 2 μm | 365 nm LED,玻璃掩膜板 |
| PDMS 多层对准精度 | ±2 μm | DZ-100 对准平台,CCD 可视化 |
| 芯片键合方式 | O₂ 等离子不可逆键合 | PDMS/PDMS、PDMS/玻璃、PDMS/硅 |
| 洁净间要求 | 普通实验室 | 桌面级设备,即买即用 |
W/O/W 双乳液、同轴聚焦液滴、水凝胶微球、细胞封装载体。
hPSC / hESC 球封装、3D 细胞培养、类器官生成与药物筛选模型。
多层 PDMS 流体控制、灌流培养、气液界面、肠/肺/肝芯片。
同平台可复现:双层液滴芯片、阶梯高度芯片、COC / 亚克力键合芯片。 从版图设计到成品芯片,普通实验室数周即可完成;配套工艺包、掩膜设计支持与现场培训。
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